摘要：為建立鰻鱺圓環(huán)病毒(Eel circovirus,EeCV)的SYBR GreenⅠ實(shí)時熒光定量PCR(qPCR)檢測方法，根據(jù)EeCV復(fù)制相關(guān)蛋白(replication-associated protein, RAP)基因的保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，并評價其靈敏性、特異性、重復(fù)性和應(yīng)用效果。qPCR的閾值循環(huán)數(shù)(Cycle threshold value,Ct值)與標(biāo)準(zhǔn)品的拷貝數(shù)線性關(guān)系良好，且線性范圍廣(1.0×108～102拷貝數(shù)/μL);可特異性檢測EeCV,而對鰻鱺皰疹病毒(Anguillid herpesvirus)、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus)、鴨圓環(huán)病毒(Duck circovirus)無擴(kuò)增；重復(fù)性強(qiáng)，組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于3%;靈敏性高于普通PCR法10倍。且qPCR檢測后發(fā)現(xiàn)，在感染EeCV的鰻鱺體內(nèi)重要器官均可檢測到EeCV,其中鰓的病毒量顯著高于其他組織；對保存的44份疑似鰻鱺病毒性感染病料進(jìn)行檢測，陽性檢出率為98%,而普通PCR法的陽性檢出率為73%。
