摘要：細(xì)胞凋亡是由一系列相關(guān)基因嚴(yán)格調(diào)控的細(xì)胞程序性死亡，在抵御病原入侵、維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)等方面有著重要意義。其中細(xì)胞色素c從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中是凋亡開始的關(guān)鍵一步。本研究利用RACE技術(shù)首次克隆獲得了克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)細(xì)胞色素c基因(PcCytc)，全長(zhǎng)為897 bp，包括163 bp的5′-UTR、419 bp的3′-UTR和315 bp的開放閱讀框，編碼104個(gè)氨基酸。定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，PcCytc基因在克氏原螯蝦的各組織中均有表達(dá)，其中在鰓、腸道和肌肉中表達(dá)高，在胃中表達(dá)最低。WSSV感染實(shí)驗(yàn)顯示，在病毒感染后PcCytc在肝胰腺、腸道和肌肉組織中的表達(dá)水平均出現(xiàn)上調(diào)，并在24 h達(dá)最高值，約是此時(shí)PBS組表達(dá)量的2.65、2.07和2.20倍，均存在極顯著性差異(P<0.01)。PcCytc基因干擾后，克氏原螯蝦體內(nèi)WSSV病毒拷貝數(shù)顯著增加(P<0.05)，表明PcCytc能夠抑制WSSV在克氏原螯蝦體內(nèi)的復(fù)制，延遲感染；同時(shí)，凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax和caspase-3的表達(dá)均發(fā)生顯著上調(diào)或下調(diào)(P<0.05)。本研究表明，PcCytc可通過調(diào)節(jié)凋亡途徑抑制WSSV感染，為克氏原螯蝦對(duì)WSSV感染的免疫反應(yīng)提供了新的見解。
